Test fermentacji węglowodanów na bakteriach w celu ustalenia ich zdolności do fermentacji węglowodanów

Test fermentacji węglowodanów na bakteriach, aby sprawdzić ich zdolność do fermentacji węglowodanów!

Zasada:

Niektóre bakterie mają zdolność fermentowania węglowodanów, w szczególności cukrów. Wśród nich każda bakteria może fermentować tylko niektóre z cukrów, podczas gdy nie może fermentować innych.

Tak więc cukry, które bakteria może fermentować, i cukry, których nie może być charakterystyczna dla bakterii.

Test fermentacji węglowodanów przeprowadza się oddzielnie w celu zbadania zdolności bakterii do fermentacji cukrów takich jak glukoza, sacharoza, laktoza, maltoza i ksyloza, a także ich pochodnych alkoholowych, takich jak eskulin, salicyna, adonitol, dulcitol i sorbitol. Jeśli bakterie mogą fermentować cukier lub pochodną cukru, powstaje kwas, który zmniejsza pH zmieniając kolor purpury bromokrezolowej z fioletowej na żółtą.

Ponadto, jeśli jest to "bakteria aerogenna", wytwarza się zarówno kwas, jak i gaz (C0 ₂ ), natomiast jeśli jest to bakteria ananerogenna, to tylko kwas wytwarza się bez gazu. Wytwarzanie gazu jest wskazywane przez jego akumulację w postaci pęcherzyka w odwróconej rurce Durhama (miniaturowa probówka).

W teście fermentacji węglowodanów bakterie testowe hoduje się w podłożu bulionowym zawierającym jeden z cukrów lub pochodnych cukrowych i purpurę bromokrezolową. Odwrócona rura Durhama jest w niej zanurzona.

Jeśli bakterie "mają zdolność fermentowania cukru lub pochodnej cukru, kolor bulionu zmienia się z purpurowego na żółty. Jeśli kumulacja gazu jest postrzegana jako pęcherzyk w rurce Durhama, jest to bakteria akogeniczna, natomiast jeśli nie obserwuje się gromadzenia się gazu, jest to bakteria beztlenowa.

Wymagane materiały:

Probówki, rurki Durham, kolba stożkowa, kołpaki bawełniane, pętelka do inokulacji, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarna, saszetka utylizacyjna, inkubator, bulion węglowodanowy (bulion zawierający konkretny cukier lub pochodne cukrowe, takie jak glukoza, sacharoza, laktoza, maltoza, ksyloza, eskulina, salicyna, adonitol, dulcytol, sorbitol itp.), wyizolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki bulionowej węglowodanów (zawierającej wymagany purpurowy węglowodan i fiolet bromokrezolowy jako główne składniki) lub gotowy proszek wymagany w 100 ml bulionu odważa się i rozpuszcza w 100 ml wody destylowanej w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml przez potrząsanie i mieszanie (rysunek 7.8).

2. Jego pH określa się przy użyciu papieru lub pH-metru pH i dostosowuje się do 6, 8 za pomocą 0, 1N HCl, jeśli jest on większy lub stosuje 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy. Kolbę ogrzewa się, jeśli jest to wymagane, w celu całkowitego rozpuszczenia składników.

3. Bulion rozdziela się na pięć probówek (w przybliżeniu po 10 ml).

4. Jedną rurkę Durham wkłada się w stan odwrócony do bulionu w każdej probówce testowej. Rurki Durhama zawierają w sobie powietrze i pływają. Podczas sterylizacji gorąca para wypiera to powietrze, dzięki czemu zanurzają się w bulionie. W związku z tym nie ma potrzeby usuwania powietrza z rur Durham przez napełnianie bulionu przed sterylizacją, aby mogły być zanurzone w bulionie.

5. Probówki są z bawełny, pokryte papierem ściernym i związane nicią lub gumką.

6. Rurki bulionowe sterylizuje się w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie. Alternatywnie, 90 ml podłoża podstawowego (medium bez węglowodanów) sterylizuje się w autoklawie i do tego po ochłodzeniu dodaje się 10 ml roztworu węglowodanu (10%) sterylizowanego przez filtrację membranową. Jest to szczególnie istotne w przypadku wrażliwych na ciepło węglowodanów, które ulegają degradacji podczas sterylizacji termicznej.

7. Rurki bulionu pozostawia się do ochłodzenia do temperatury pokojowej.

8. Bakterie testowe zaszczepia się aseptycznie, najlepiej w komorze z przepływem laminarnym, do bulionu za pomocą sterylizowanej pętli inokulacyjnej nad płomieniem bunsen. Pętla jest sterylizowana po każdej inokulacji.

9. Zaszczepione buliony bulionowe inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w inkubatorze.

Obserwacje:

1. Kolor bulionu zmienia się na żółty, a gaz gromadzi się w rurce Durhama: Fermentujący dla węglowodanów i kwasu azotowego.

2. Kolor bulionu zmienia się na żółty, ale w rurce Durhama nie gromadzi się gaz: Fermentujący dla węglowodanów i beztlenowy.

3. Kolor bulionu się nie zmienia: niefermentujący dla węglowodanów.