Test wykorzystania cytrynianów w celu sprawdzenia zdolności bakterii do wykorzystania cytrynianu jako źródła węgla

Staraj się przeprowadzić test wykorzystania cytrynianu, aby sprawdzić zdolność bakterii do wykorzystania cytrynianu jako jedynego źródła węgla.

Zasada:

Niektóre bakterie mają zdolność wzrostu w podłożu bez organicznych C i N.

Mogą wykorzystywać cytrynian sodu jako jedyne źródło C i diwodorofosforanu amonu (NH ₄ H _{2 P 0} ₄ ) jako jedyne źródło N. Wykorzystują one NH ₄ H _{2 P 0} _4, aby uzyskać N przy wytwarzaniu NH ₃, co zwiększa pH powodujące zmianę barwy błękitu bromotymolowego z zielonego (pH = 6, 9) na niebieski (pH powyżej 7, 6).

W teście wykorzystania cytrynianu bakterie testowe hoduje się na skosach agarowych nie zawierających organicznych C lub N, raczej zawierających cytrynian sodu, NH4H2PO4 i błękit bromotymolowy. Jeśli bakteria ma zdolność wykorzystania cytrynianu jako jedynego źródła C, wykazuje wzrost na skosach. Wykorzystuje również NH ₄ H ₂ P0 ₄ jako jedyne źródło N powodujące zmianę koloru skosów z zielonego na niebieski.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, bawełniane zatyczki, igła do szczepienia, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarna, saszetka utylizacyjna, inkubator, cytrynian Simmonsa, izolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki cytrynianowej Simmonsa (zawierającej cytrynian sodu, NH ₄ H, P0 ₄ i błękit bromotymolowy jako główne składniki) lub jej gotowy proszek wymagany do napełnienia 100 ml pożywki są odważane i rozpuszczane w 100 ml destylatu wodę w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml poprzez wstrząsanie i wirowanie (rysunek 7.6).

2. Jego pH określa się przy użyciu papieru lub pH-metru pH i dostosowuje się do 6, 9 za pomocą 0, 1N HCl, jeśli jest on większy lub stosuje 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy.

3. Kolbę ogrzewa się w celu całkowitego rozpuszczenia agaru w podłożu.

4. Zanim się zestali, podłoże w stanie ciepłym stopionym rozdziela się na 5 probówek (w przybliżeniu po 20 ml).

5. Probówki są z bawełny, pokryte papierem ściernym i związane nicią lub gumką.

6. Są sterylizowane w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie.

7. Po sterylizacji są one usuwane z autoklawu i utrzymywane w pozycji skośnej w celu schłodzenia i zestalenia podłoża, tak aby uzyskać skosy cytrynianowe agarowe.

8. Badane bakterie zaszczepia się w warunkach aseptycznych, najlepiej w komorze z przepływem laminarnym, w skosy przez wbicie w tyłek i smugi na powierzchni skosów za pomocą sterylizowanej płomieniem igły. Igła jest sterylizowana po każdej inokulacji.

9. Zaszczepione skosy inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 24 do 48 godzin w inkubatorze.