Test koagulazy na bakteriach, aby dowiedzieć się, jakie są ich zdolności do krzepnięcia krwi (z figurą)

Test koagulazy na bakteriach, aby dowiedzieć się ich umiejętności krzepnięcia krwi (z figurą)!

Zasada:

Patogenne szczepy bakterii Staphylococcus zawierają enzym koagulase, który działa w tkankach gospodarza w celu przekształcenia fibrynogenu w fibrynę.

Utworzona siatka fibrynowa otacza komórki bakteryjne lub zainfekowane tkanki, chroniąc bakterie przed nieswoistymi mechanizmami odporności gospodarza, takimi jak fagocytoza i aktywność przeciwgrzybicza zdrowej surowicy.

Enzym ten pomaga również w koagulacji krwi u gospodarza, będąc prekursorem substancji podobnej do trombiny, która koaguluje lub krzepnie krew. Test koagulazy przeprowadza się w celu rozróżnienia między koagulazo-dodatnim (patogennym lub zjadliwym)) a koagulazo-ujemnym (niepatogennym lub niezjadliwym) Staphylococcus.

W teście koagulazy zawiesinę badanego gatunku Staphylococcus miesza się z osoczem krwi, a zaszczepione osocze jest następnie okresowo badane pod kątem tworzenia lub koagulacji fibryny.

Tworzenie się skrzepu w ciągu czterech godzin jest interpretowane jako wynik pozytywny i wskazuje na zjadliwy (patogenny) szczep Staphylococcus. Brak koagulacji po 24 godzinach inkubacji jest wynikiem ujemnym, co wskazuje na wirulentny (niepatogenny) szczep.

Wymagane materiały:

Zwierzę laboratoryjne (królik lub świnka morska), strzykawka, antykoagulant (cytrynian sodu lub heparyna), probówki do pobierania krwi, wirówka, probówki, szkiełko, pętla do inokulacji, palnik bunsena, komora laminarna, słoik utylizacyjny, izolowane kolonie lub czyste kultury bakterii z rodzaju Staphylococcus.

Procedura:

1. Strzykawkę i probówki do pobierania krwi przemywa się roztworem cytrynianu sodu lub heparyny, aby zapobiec krzepnięciu krwi natychmiast po pobraniu krwi (rysunek 7.24).

2. Za pomocą strzykawki pobiera się krew od zwierząt laboratoryjnych, takich jak królik lub świnka morska, i umieszcza w probówkach do pobierania.

3. Krew odwirowuje się przy 3000 obrotach na minutę przez 15 minut w wirówce.

4. Supernatant (osocze) zbiera się w innej cytrowanej probówce testowej, a pozostałość (krwinki) odrzuca się.

(a) Metoda przesuwania:

1. Dwie krople zawiesiny badanych bakterii należących do rodzaju Staphylococcus umieszcza się na dwóch równo podzielonych połówkach szkiełka za pomocą pętli inokulacyjnej. Jedna kropla jest używana jako "kontrola", aby zobaczyć, czy sama bakteria jest w kępkach, a druga kropla jest używana jako "test".

2. Do "kropli testowej" dodaje się kroplę zebranego osocza, miesza i inkubuje w temperaturze pokojowej.

3. Krople obserwuje się w odstępach godzinnych do 4 godzin.

(b) Metoda rurki:

1. Pobrano dwie małe probówki. Jedna probówka jest oznaczona jako "test", a druga "kontrola". W każdej probówce testowej pobiera się 0, 5 ml zawiesiny bakteryjnej.

2. Do probówki "testowej" dodaje się 1 ml osocza, miesza i inkubuje

3. Rurki obserwuje się w odstępach godzinnych do 4 godzin.