Eksperyment do hodowania wirusa zwierzęcia w zarodkowym jajku kukułkowym (z rysunkiem)

Eksperyment do hodowania wirusa zwierzęcego w zarodkowym jajku kurcząt!

Zasada:

Wirusy mogą rosnąć tylko w żywych systemach. Nie mogą rosnąć w nieżywych mediach, takich jak agar odżywczy lub bulion odżywczy. Dlatego ich hodowla potrzebuje komórek gospodarza podatnych na specyficzny wirus.

Wirus, taki jak bakteriofag, który infekuje i rośnie w komórkach bakterii, jest hodowany z wykorzystaniem kultur komórek bakteryjnych jako żyjącego systemu.

Na przykład, wirus koloidów (bakteriofag) jest hodowany z wykorzystaniem kultury bakterii E. coli. W przeciwieństwie do tego wirusy zwierzęce, które zarażają i rosną w ciele zwierząt, wymagają systemów żyjących zwierząt podatnych.

Trzy żywe systemy zwierzęce stosowane do hodowli wirusów zwierzęcych w laboratoriach są następujące:

1. Zwierzęta podatne:

W tej technice wirus, który ma być hodowany, może rosnąć w ciele żywego zwierzęcia, takiego jak mysz lub świnka morska, które są podatne na ten wirus. Ta technika nie jest już stosowana, ponieważ została zastąpiona przez nowsze, wydajniejsze i bardziej ekonomiczne techniki.

2. Kultura tkankowa:

Jest to bardzo wyrafinowana technika. Tutaj komórki zwierzęce, o których wiadomo, że są podatne na wirus, który ma być hodowany i szybko się namnażają, są najpierw izolowane z odpowiedniej żywej tkanki zwierzęcia. Komórki te umieszcza się w naczyniu szklanym lub plastikowym zawierającym wyjątkowo bogate pożywki. Komórki przyczepiają się do powierzchni naczynia i dzielą się dalej, aż cała powierzchnia pokryta jest konfluentną monowarstwą komórek. Nazywa się to kulturą tkankową.

Następnie wirus, który ma być hodowany, zostaje zaszczepiony w podatnej hodowli tkankowej. Wirus infekuje żywe komórki kultury tkankowej, podkręca ich mechanizmy metaboliczne i szybko się replikuje, a tym samym obficie rośnie w komórkach.

3. Embryonated Chick Eggs:

W tej prostej i ekonomicznej technice wirus, który ma być hodowany, wstrzykuje się do jaja kurzego z zarodkami. Wirus rozwija się w żywym jaju kurzym i wywołuje chorobę w zarodku, objawiając się kilkoma objawami choroby (efektami cytopatogennymi) charakterystycznymi dla tego wirusa. Obecność tych objawów wskazuje na wzrost tego wirusa w jajku.

Wymagane materiały:

Dwa zarodkowane jaja kurze, urządzenie do świecenia, jod nalewki, chłonna bawełna, 70% alkohol, małe wiertło, rozcieńczenie 1: 2 wirusa Newcastle, strzykawka, sterylny vasper, sterylna sól fizjologiczna, szalki Petriego, palnik bunsena, komora laminarna, słoik, inkubator.

Procedura:

1. Dwa zarodkowane jaja kurze są oświetlane przy użyciu przyrządu do świecenia, aby zademonstrować żywotność zarodka. Zarodek jest żywy, jeśli wykazuje ruch w odpowiedzi na ciepło ze światła. Również pozycje worka powietrznego i dużych naczyń krwionośnych są określane i zaznaczane na skorupce jaja podczas świecenia (rysunek 8.7).

2. Osłonkę dezynfekuje się na worku powietrznym za pomocą nalewki jodowej, a następnie pozostawia do wyschnięcia. To samo miejsce jest wacikiem z chłonnej bawełny nasączonej 70% alkoholem.

3. Końcówkę małego wiertła sterylizuje się zanurzając w 70% alkoholu, a następnie płonąc.

4. Używając tego wiertła, wykonuje się aseptycznie mały otwór na skorupie nad workiem powietrznym w obszarze oddalonym od naczyń krwionośnych.

5. 0, 2 ml rozcieńczenia 1: 2 wirusa Newcastle jest aseptycznie wstrzyknięte do jamy omoczniowej jednego z dwóch jaj przy użyciu sterylizowanej strzykawki. Odbywa się to poprzez trzymanie jaja w pozycji pionowej, wprowadzając igłę strzykawki przez otwór na skorupie do rękojeści pod kątem 45 °, przebijając membranę worka powietrznego i penetrując do jamy omoczniowej. To jajo zaszczepione wirusami służy jako "jajo testowe".

6. Po zaszczepieniu igła jest wyjmowana, a otwór na osłonce jest uszczelniony sterylnym gorącym vasper.

7. Stosując tę ​​samą technikę, 0, 2 ml sterylnej soli fizjologicznej inokuluje się w inne zalęgnięte jajo kurczęcia, które służy jako "jajo kontrolne".

8. Obydwa jaja są inkubowane w temperaturze 37 ° C przez 3-4 dni w inkubatorze o odpowiedniej wilgotności.

9. Obserwacje są notowane codziennie.

10. Po stwierdzeniu śmierci zarodek zostaje usunięty ze skorupki, a zawartość wlewa się do szalki Petriego i ponownie obserwuje.

11. Wszystkie zanieczyszczone materiały są wyrzucane do zlewki zawierającej proszek wybielający.

Obserwacje:

1. Jaja są codziennie ślazowane podczas inkubacji i obserwowane pod kątem śmierci embrionalnej, o czym świadczy zaprzestanie ruchu, które zwykle występuje od 3 do 4 dni po inokulacji wirusa.

2. Po stwierdzeniu śmierci zarodek zostaje usunięty ze skorupki, a zawartość zostaje wylana na płytkę Petriego. Jest obserwowany w przypadku martwiczych zmian i oznak krwotoku.

3. Kontrolne jajo jest badane pod kątem dowodów na działanie cytopatogenne.

4. Obserwacje są zapisane w tabeli 8.2.