Eksperyment: Test ruchliwości bakterii: preparat do zawieszania kropli (z rysunkiem)
Staraj się wykonać badanie ruchliwości bakterii, przez powieszenie preparacji kropelkowej, aby sprawdzić, czy jest ruchliwa czy nieruchliwa.
Cel, powód:
Ruchliwość oznacza zdolność ruchu własną mocą. Na podstawie ruchliwości bakterie można podzielić na dwie grupy w następujący sposób.
(1) Bakterie ruchowe:
Bakteria, która ma wewnętrzną zdolność ruchu w otaczającym medium, w którym pozostaje zawieszona, jest bakterią ruchliwą.
(2) Bakterie nieruchliwe:
Bakteria, która nie ma wewnętrznej zdolności ruchu w otaczającym medium, w którym pozostaje zawieszona, jest bakterią nieruchliwą. Nieruchliwe bakterie mogą wykazywać pozorną ruchliwość, wynikającą z ich ruchu brwińskiego spowodowanego bombardowaniem cząsteczek wody w otaczającym środowisku, komórkami bakteryjnymi.
W mokrym wierzchu, chociaż można zaobserwować kształt i rozmiar bakterii, ruchliwość może być utrudniona, ponieważ zawiesina jest wciskana pomiędzy szkiełkiem a szkiełkiem nakrywkowym. Dlatego; przygotowanie zawiesiny lub test ruchliwości przeprowadza się dla wyraźnej obserwacji ruchliwości bakterii, oprócz ich kształtu i wielkości. Jest przydatny w identyfikacji bakterii.
Zasada:
Bardzo mała kropla zawiesiny bakterii zawisła ze środka szkiełka nakrywkowego do wnęki suwaka wnęki. Zawieszony spadek obserwuje się pod mikroskopem przy użyciu obiektywu immersyjnego. Jeśli bakterie są ruchliwe, można zaobserwować, że komórki mają nieprawidłowy ruch w otaczającym medium.
W przeciwieństwie do tego, jeśli jest ona nieruchliwa, jej komórki pozostają statyczne w ośrodku bez żadnego ruchu lub mogą wykazywać ruchy brwiowe wynikające z bombardowania przez cząsteczki wody w ośrodku, na komórkach bakterii.
Wymagane materiały:
Zjeżdżalnia, szkiełko nakrywkowe, wazelina lub wazelina, olej immersyjny, 24-godzinna hodowla bulionowa bakterii, pętla i mikroskop (związek, ciemne pole lub kontrast fazowy).
Procedura:
1. Sejf wnękowy jest prawidłowo czyszczony pod bieżącą wodą, tak, że woda nie pozostawia kropel na swojej powierzchni. Slajd wnękowy jest szklanym szkiełkiem z małym okrągłym zagłębieniem w środku, w którym może wisieć mała kropla zawiesiny bakterii (rysunek 5.3).
2. Slajd suszy się, przecierając papierem z bibuły, a następnie przesuwając go nad płomieniem lub utrzymując w słońcu.
3. Pierścień wazeliny (lub wazelina) nakłada się wokół jamy.
4. Pętlę sterylizuje się nad płomieniem i chłodzi. Zawiesinę zawiesiny bakterii pobierano aseptycznie z 24-godzinnej hodowli bulionowej. Mała kropla zawieszenia jest umieszczona pośrodku szkiełka nakrywkowego. Kultura bulionowa nie powinna być starsza niż 24 godziny, ponieważ bakterie mogą tracić swoją ruchliwość, ponieważ dorastają.
5. Wsuwaną wnękę odwraca się i umieszcza na szkiełku nakrywkowym, w taki sposób, aby wnęka zakrywała kroplę.
6. Suwak i przykrywka są delikatnie dociskane, tak aby wnęka była szczelnie zamknięta. Należy uważać, aby żadna część wnęki nie dotykała kropli.
7. Slajd jest szybko odwrócony tak, że kropla wisi w zagłębieniu bez jej dotykania.
8. Slajd zostaje przypięty do mikroskopu.
9. Krawędź kropli jest skupiona na celu niskiej mocy.
Powody do ogniskowania krawędzi kropli są następujące:
(a) Lepszy kontrast uzyskuje się dzięki różnicy we współczynniku załamania kropli i poślizgu pokrywy.
(b) Gdy kropla się zawiesi, opada w kierunku krawędzi, dla której krawędź zawiera mniejszą liczbę bakterii, które należy wyraźnie obserwować pod względem ruchliwości.
(c) Zwykle bakterie tlenowe zbliżają się do krawędzi, aby uzyskać więcej tlenu do oddychania, co można zaobserwować na krawędzi.
10. Kroplę oleju immersyjnego nakłada się na szkiełko nakrywkowe tuż nad wiszącym kroplą, a krawędź zwisającej kropli obserwuje się pod obiektywem zanurzonym w oleju mikroskopu. Najlepiej użyć mikroskopu z kontrastem fazowym lub ciemnego pola do wyraźnej obserwacji.
Obserwacje (w ramach Celu zanurzenia w oleju):
1. Ruchliwość:
Ruchliwe lub nieruchliwe
2. Kształt bakterii:
Kulisty (coccus)
W kształcie pręta (pałeczki)
Comma-like (vibrio)
Spirala (krętki)
3. Rozmieszczenie bakterii:
Pary (diplobacillus / diplococcus)
W czwórce (tetradach)
W łańcuchach (streptococcus / streptobacillus)
Klastry przypominające winogrona (gronkowce)
Sześcienne (sarcinae lub octet).
4. Rozmiar bakterii:
Oszacowując wzrok, wykonaj rysunek pola pod obiektywnym zanurzeniem w oleju.
(3) Barwienie:
Cel barwienia:
Współczynnik załamania komórek bakterii jest bardzo zbliżony do współczynnika załamania wody, w którym są one zawieszone podczas obserwacji, a także wskaźnika szkiełka, na którym są obserwowane pod mikroskopem. Dlatego bardzo trudno jest je wyraźnie obserwować.
Aby przezwyciężyć tę trudność, komórki są zabarwione plamami, które nadają komórkom intensywny kolor i jasny kolor otaczającemu je medium, w którym są zawieszone. Głęboko zabarwione komórki uzyskują wyraźny kontrast w stosunku do jasnego tła i można je wyraźnie zaobserwować.
Zatem barwienie jest metodą nadawania koloru przezroczystym mikroorganizmom w inny sposób z pomocą różnych biologicznych barwników zwanych "plamami" dla ich mikroskopowej obserwacji.
Chemia plam:
Barwniki są trzech następujących typów:
1. Barwniki:
Są stosowane do kolorowania ogólnego, np. Do barwienia materiałów tekstylnych i do barwienia ścian.
2. Plamy:
Są one używane do barwienia próbek biologicznych lub mikrobiologicznych. Są bardziej dokładne i wymagające.
3. Wskaźniki:
Są to chemikalia, które zmieniają kolor wraz ze zmianą stężenia jonów wodorowych (pH).
Chociaż termin "barwnik" jest odpowiednim terminem, termin "barwnik" jest szeroko stosowany w mikrobiologii jako środek barwiący. W przeszłości naturalne barwniki przygotowywano z różnych roślin. Zostały one szeroko zastąpione przez syntetyczne barwniki.
Ponieważ pierwszy syntetyczny barwnik został przygotowany z aniliny, wszystkie syntetyczne barwniki nazywane są "barwnikami anilinowymi". Jednak większość tych barwników jest obecnie wytwarzana ze smoły węglowej, dla której nazywane są obecnie "barwnikami węglowymi". Barwniki smoły węglowej są pochodnymi benzenu. Cząsteczka barwnika składa się z trzech składników (rysunek 5.4) podanych poniżej.
(a) Pierścień benzenowy
(b) Grupa chromoforów
(c) Grupa auksochromowa
Benzen jest organicznym bezbarwnym rozpuszczalnikiem, a chromofor jest składnikiem barwiącym barwnika. Benzen łączy się z chromoforem tworząc chromogen (ryc. 5.5). Ponieważ chromogen nie posiada właściwości dysocjującej, nie może łączyć się z komórkami i łatwo się zmywa.
Kiedy chromogen łączy się z auksochromem, powstaje barwnik lub bejca. Auksochrom nadaje właściwości dysocjacji elektrolitycznej (właściwości tworzenia soli) barwnikowi. Zatem chemicznie bejce określa się jako związek organiczny zawierający pierścień benzenowy, grupę chromoforową i grupę auksochromową.
Rodzaje barwienia:
Barwienie bakterii jest różnego rodzaju, jak opisano poniżej (rysunek 5.6).
I. Proste barwienie:
Tutaj używana jest tylko jedna plama. To zabarwienie służy do obserwowania kształtu (cocci, pałeczek, vibrio, spireli) i rozmieszczenia (pojedynczego, pary, tetradu, łańcucha, gron) bakterii.
Składa się z dwóch następujących typów:
A. Podstawowe barwienie:
W przypadku barwienia zasadowego do barwienia komórek bakteryjnych stosuje się podstawowe zabarwienie, takie jak błękit metylenowy, fiolet krystaliczny lub fuksyna z karbolu. Plama wiąże się ściśle z komórkami bakterii i nadaje głęboki kolor plamce komórkom, podczas gdy otaczający ośrodek otrzymuje lekki kolor plamy.
B. Barwne barwienie:
W barwieniu kwasowym, kwasowe zabarwienie, takie jak eozyna lub nigrozyna, stosuje się do ujemnego barwienia komórek bakteryjnych. Plama sprawia, że otoczenie jest kolorowe, a komórka bakterii pozostaje bezbarwna.
II. Barwienie różnicowe:
Tutaj stosuje się więcej niż jedno plamy. Jest wykonywany dla następujących celów.
A. Separacja w grupy:
Te zróżnicowane metody barwienia przeprowadza się w celu różnicowania bakterii na różne grupy w oparciu o ich charakterystykę barwienia.
Te metody obejmują:
(za) Gramowanie:
Ta metoda barwienia jest przeprowadzana w celu rozróżnienia bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych.
(b) Natychmiastowe barwienie kwasem:
Przeprowadza się go w celu rozróżnienia między bakteriami szybko kwasowymi i bezkwasowymi.
B. Wizualizacja konkretnych struktur bakterii:
Te zróżnicowane metody barwienia są wykonywane w celu wizualizacji określonych składników strukturalnych komórek bakteryjnych.
Te metody obejmują:
(za) Barwienie przetrwalników:
Ta metoda barwienia jest stosowana do barwienia endospor bakterii tworzących przetrwalniki.
(b) Barwienie kapsułek:
Ta metoda służy do barwienia kapsułki, która otacza kapsułkowane bakterie.
(do) Barwienie flagelli:
Wykonuje się ją w celu wizualizacji wici zakażonych bakterii.
(re) Włączanie barwienia:
Ten sposób barwienia przeprowadza się w celu wybarwienia inkluzji komórkowych komórek bakteryjnych, takich jak granulki volutin, granulki glikogenu i granulki PBH.
