Eksperyment przeprowadzania podstawowego barwienia bakterii w celu obserwacji jego kształtu, rozmiaru i rozmieszczenia

Staraj się wykonać proste podstawowe barwienie bakterii, aby obserwować jego kształt, wielkość i układ.

Cel, powód:

Nie można zaobserwować naturalnego kształtu, wielkości i rozmieszczenia bakterii poprzez podstawowe zabarwienie, ponieważ te cechy są zniekształcone przez utrwalanie termiczne.

Poza tym niektóre bakterie (np. Spiraliki) są trudne do wybarwienia.

Zatem barwienie negatywne przeprowadza się z dwóch powodów, jak następuje:

(za) Aby obserwować naturalny kształt, wielkość i rozmieszczenie bakterii, ponieważ nie ma tu miejsca na utrwalanie termiczne.

(b) Obserwować te bakterie, które trudno jest zabarwić?

Zasada:

Komórki bakterii niosą ładunek ujemny na swojej powierzchni, dzięki czemu otoczone są kationami, takimi jak Na ⁺ i K ⁺ (rysunek 5.9). W barwieniu kwasowym stosuje się kwasowe zabarwienie, które jonizuje w anionowy chromogen (ujemnie naładowany jon barwnika) i kation.

Negatywnie naładowane chromogeny są odpychane przez ujemne ładunki powierzchniowe na komórkach bakterii, dzięki czemu barwnik nie może penetrować komórki. Teraz nie wybarwione komórki są łatwo rozpoznawalne na kolorowym tle.

Wymagane materiały:

Slajdy, pętla, barwnik kwasowy (eozyna / nigrozyna), bulion / płytka / hodowla skośna bakterii, mikroskop, olej immersyjny.

Procedura:

1. Slajd jest prawidłowo czyszczony pod bieżącą wodą, tak aby woda nie pozostała jak krople na jego powierzchni (rysunek 5.10).

2. Przylegającą wodę ściera się papierem z bibuły i suszy się na powietrzu.

3. Mała kropla kwaśnej plamy (nigrosin / eozyna) umieszcza się blisko jednego końca szkiełka.

4. Pętlę sterylizuje się nad płomieniem i chłodzi. Aseptycznie pętlę bakterii z płytki agarowej lub skosu lub pętlę zawiesiny bakterii z płynnego bulionu przenosi się do kropli bejcy. Zawiesinę bakterii w plamce sporządza się delikatnie mieszając pętlę bakterii w kropli plamy, w taki sposób, aby kropla nie rozprzestrzeniała się.

5. Kolejna czysta prowadnica jest utrzymywana pod kątem 30 ° do pierwszego suwaka, w taki sposób, że jedna wąska krawędź pierwszego dotyka powierzchni późniejszej w kierunku końca bez plamienia.

6. W tym pochylonym położeniu drugi suwak jest ciągnięty do przodu w kierunku kropli plam, aż jego krawędź dotknie kropli, a kropla rozleje się wzdłuż jej krawędzi.

7. W tym pochylonym położeniu drugi suwak jest przesuwany do tyłu, aby utworzyć cienki rozmaz bakterii.

8. Rozmaz jest suszony na powietrzu. Utrwalanie ciepła nie jest tutaj wykonywane.

9. Slajd jest przytwierdzony do stopnia mikroskopu, a rozmaz obserwowany przy niskiej mocy i wysokich suchych celach.

10. Kroplę oleju immersyjnego nakłada się na rozmaz.

11. Smuga jest obserwowana w ramach celu "zanurzenia w oleju".

Obserwacje (w ramach Celu zanurzenia w oleju):

1. Kształt bakterii:

Kulisty (coccus)

W kształcie pręta (pałeczki)

Comma-like (vibrio)

Spirala (krętki)

2. Rozmieszczenie bakterii:

Pary (diplobacillus / diplococcus)

W czwórce (tetradach)

W łańcuchach (streptococcus / streptobacillus)

Klastry przypominające winogrona (gronkowce)

Sześcienne (sarcinae lub oktet)

3. Rozmiar bakterii:

Oszacowując wzrok, wykonaj rysunek pola pod obiektywnym zanurzeniem w oleju.