Technika fluorescencji-przeciwciała do wykrywania określonych bakterii w próbce
Przeczytaj ten artykuł, aby zapoznać się z techniką Fluorescencji-Przeciwciała Głównego w celu wykrycia konkretnej bakterii w próbce!
Celem jest poznanie zasady immunofluorescencji lub techniki fluorescencji-przeciwciała do wykrywania określonych bakterii w próbce.
Technika fluorescencji-przeciwciała lub immunofluorescencji jest szybką i niezawodną procedurą wykrywania określonych bakterii w próbce. Dostępnych jest wiele przeciwciał znakowanych barwnikami fluorescencyjnymi, takimi jak izocyjanian fluoresceiny lub izotiocyjanian, każdy specyficzny dla poszczególnych bakterii.
Jedno z tych oznaczonych przeciwciał, specyficzne dla konkretnych bakterii, które mają być wykrywane, dodaje się kroplami do utrwalonego na gorąco wymazu z nieznanej próbki bakterii na szkiełku i delikatnie rozprowadza po powierzchni wymazu. Zwilżoną bibułę filtracyjną umieszcza się wewnątrz szalki Petriego.
Następnie szkiełko umieszcza się wewnątrz na szklanym pręciku w kształcie litery U i inkubuje w 25 ° C przez 35 minut. Nadmiar przeciwciała na rozmazie jest wymywany za pomocą 1% roztworu soli buforowanego fosforanem. Preparat zanurzono w słoiku Coplin zawierającym 1% roztwór soli buforowany fosforanem w 25 ° C przez 10 minut. Slajd suszy się papierem z bibuły. Jedna kropla glicerolu jest dodawana do rozmazu. Jest pokryty szkiełkiem nakrywkowym i zbadany pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Jeżeli bakterie swoiste dla znakowanego przeciwciała są obecne w nieznanej próbce bakterii, powstaje kompleks antygen-przeciwciało (tutaj bakteria jest antygenem). Ponieważ przeciwciało jest znakowane substancją fluorescencyjną, kompleks antygen-przeciwciało emituje fluorescencję, gdy jest obserwowany pod mikroskopem fluorescencyjnym. Jeżeli bakterie specyficzne dla przeciwciała nie występują, przeciwciało fluorescencyjne jest wymywane i nie obserwuje się fluorescencji.