Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ (FISH)
W tym artykule omówimy Fluorescencyjną hybrydyzację in situ (FISH).
Jest to technika laboratoryjna stosowana do określenia, ile kopii danego segmentu DNA jest obecnych w komórce. Identyfikuje określony region chromosomalny w preparatach cytologicznych. W laboratorium segment DNA jest chemicznie modyfikowany lub barwiony barwnikiem fluorescencyjnym, a gdy jest badany w mikroskopie fluorescencyjnym, wygląda bardzo jasno w kolorze fluorescencyjnym.
Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ znacznie zwiększyła czułość, swoistość i rozdzielczość analizy chromosomów.
Zalety tej techniki są liczne, ale niektóre są wymienione w następujący sposób:
(1) Rozdzielczość tej metody jest znacznie lepsza niż w przypadku tradycyjnego pasma chromosomów i około 2 mega zasad (Mb).
(2) Protokół tej techniki jest łatwy i ma zastosowanie zarówno do dzielących się komórek, jak i nie dzielących się komórek. Technika ta może identyfikować zakres mutacji, w tym delecję, duplikację, aneuploidię i obecność chromosomów pochodnych. Technika ta jest również powszechnie stosowana do monitorowania nawracającej lub rezydualnej choroby u pacjentów po przeszczepieniu szpiku kostnego.
FISH (Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ) jest ogólnie przeprowadzana na stymulowanej krwi obwodowej zarówno dla analizy chromosomalnej, jak i identyfikacji specyficznej translokacji i delecji. Na przykład, jest on używany do wykazania chromosomu Philadelphia (Ph 1 ) utworzonego przez translokację między chromosomem 9 i 22 i powoduje przewlekłą białaczkę szpikową (CML).
Jest również stosowany w identyfikacji translokacji między chromosomem 8 i 14, która powoduje chłoniaka Burkitta i między chromosomami 18 i 14, które powodują białaczkę limfocytów B. Jest również stosowany do diagnozy zespołu Downa.
W procedurze FISH można przygotować kultury komórkowe. Metafazę / chromosomy prometafazowe umieszcza się na szkiełku. Ponadto FISH można zmodyfikować do analizy jąder międzyfazowych. Następnie chromosomy są denaturowane; Następnie wprowadza się wyznakowaną sondę DNA, a następnie sondę hybrydyzuje z chromosomem na szkiełku. Dlatego podano pojęcie hybrydyzacji in situ.
Sondy DNA są znakowane fluorochromem, taka sonda daje sygnał fluorescencyjny i może być widziana za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. Fluorescencję można odjąć za pomocą filtrów umieszczonych w mikroskopie fluorescencyjnym.
Sondy FISH mają długość około 40 kilo zasad (kb) i są wykrywane jako podwójny sygnał fluorescencyjny na każdym elemencie pary chromosomów. Podwójna kropka odpowiada sygnałom z każdej z dwóch powiązanych chromatyd siostrzanych.
W prostym zastosowaniu normalny wzorzec FISH dla każdej takiej sondy byłby dwoma zestawami podwójnych kropek, po jednym zestawie dla każdego członka normalnie sparowanych chromosomów. Te podwójne kropki często łączą się, tworząc jeden sygnał. Komórki monosomowe dla omawianego regionu chromosomowego wykazywałyby tylko pojedynczy zestaw podwójnych kropek na jądro, podczas gdy komórki trisomiczne pokazywałyby trzy zestawy podwójnych kropek.
