Czerwony metylowy test, aby sprawdzić zdolność bakterii do wykorzystania glukozy (z rysunkiem)

Przeczytaj ten artykuł, aby zapoznać się z testem czerwieni metylowej (test MR), aby dowiedzieć się, jak bakteria może wykorzystywać glukozę, wytwarzając stabilny kwas jako produkt końcowy!

Zasada:

Niektóre bakterie mogą wykorzystywać glukozę i przekształcać ją w stabilny kwas, taki jak kwas mlekowy, kwas octowy lub kwas mrówkowy jako produkt końcowy.

Te bakterie początkowo metabolizują glukozę do kwasu pirogronowego, który jest dalej metabolizowany poprzez "mieszany szlak kwasowy w celu wytworzenia stabilnego kwasu.

Rodzaj wytwarzanego kwasu różni się w zależności od gatunku i zależy od specyficznych szlaków enzymatycznych obecnych w bakteriach. Wytworzony kwas obniża pH do 4, 5 lub poniżej, na co wskazuje zmiana zabarwienia czerwonego metylu z żółtego na czerwony.

W teście czerwieni metylowej (test MR) bakterie testowe hoduje się w pożywce bulionowej zawierającej glukozę. Jeśli bakteria ma zdolność wykorzystywania glukozy z wytwarzaniem stabilnego kwasu, kolor czerwieni metylowej zmienia się z żółtego na czerwony po dodaniu do hodowli bulionowej.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, bawełniane zatyczki, pętla do inokulacji, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarna, saszetka utylizacyjna, inkubator, bulion MR-VP (czerwony metylowy - bulion Voges Proskauer lub bulion fosforanu glukozy), roztwór czerwieni metylowej, izolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki bulionowej MR-VP (zawierającej glukozę jako główny składnik) lub jej gotowy proszek wymagany w 100 ml bulionu odważa się i rozpuszcza w 100 ml wody destylowanej w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml przez wstrząsanie i mieszając. Bulion MR-VP jest również nazywany bulionem fosforanu glukozy (rysunek 7.4).

2. Jego pH określa się za pomocą papieru lub pH-metru pH i dostosowuje się do 6, 9 za pomocą 0, 1N HCl, jeśli jest on większy lub stosując 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy. Kolbę ogrzewa się, jeśli jest to wymagane, w celu całkowitego rozpuszczenia składników.

3. Bulion rozdziela się na pięć probówek (w przybliżeniu po 10 ml), bawełnianych, pokrytych papierem ściernym i przewiązanych nicią lub gumką.

4. Rurki bulionowe sterylizuje się w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie.

5. Rurki bulionu pozostawia się do ochłodzenia do temperatury pokojowej.

6. Badane bakterie zaszczepia się aseptycznie, najlepiej w komorze z przepływem laminarnym, za pomocą pętli inokulacyjnej wysterylizowanej na płomieniu bunsen. Pętla jest sterylizowana po każdej inokulacji.

7. Zaszczepione buliony bulionu inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 24 do 48 godzin w inkubatorze.

8. Alkoholowy roztwór czerwieni metylowej (3-4 krople) jest wpuszczany do każdej probówki.

Obserwacje:

1. Otrzymany kolor czerwony: MR dodatni (tj. Bakteria przekształciła glukozę w stabilny kwas, co wskazuje konwersja czerwieni metylowej z żółtej na czerwoną, co wskazuje na fermentację mieszaną kwasem).

2. Nie otrzymano czerwonego koloru: MR ujemny (tj. Glukoza w pożywce nie została przekształcona w stabilny kwas, co wskazuje na fermentację glikolu butylenowego).