Test redukcji azotanów na bakteriach, aby dowiedzieć się, jak zmniejszyć azotany

Przeczytaj ten artykuł, aby dowiedzieć się o skuteczności testu redukcji azotanów na bakteriach, aby dowiedzieć się, jak zmniejszyć poziom azotanów!

Zasada:

Niektóre bakterie mają zdolność redukowania azotanów, ponieważ mogą wytworzyć enzym "reduktazy azotanowej".

Enzym ten, w obecności odpowiedniego donora elektronów, redukuje azotany (N0 3 - ) do azotynów (N0 2 - ). Obecność N02 - jest wskazana przez kwas sulfanilowy i a-naftyloaminę, które zmieniają kolor na czerwony.

W teście redukcji azotanów badane bakterie hoduje się w pożywce bulionowej zawierającej azotan (N0 3 - ). Jeśli bakteria ma zdolność do redukowania azotanów, bulion nabiera czerwonego koloru po dodaniu kwasu sulfanilowego i a-naftyloaminy.

Jeśli nie powstaje czerwony kolor, oznacza to, że albo N0 3 - wcale się nie zmniejsza przez bakterie, albo bakteria produkuje bardzo silny enzym reduktazy azotanowej, który gwałtownie redukuje N03 - poza N02 - do NH3 i N2. Aby to potwierdzić, dodaje się niewielką ilość pyłu cynkowego, który redukuje NO 3 -, jeśli jest dostępny w medium, do N0 2 -, powodując w ten sposób czerwony kolor.

Tak więc, jeśli wytwarza się czerwony kolor, wskazuje to, że N03- jest obecny w podłożu niezmienionym, a bakterie nie mają zdolności do redukowania azotanów. Jeśli nie powstaje czerwony kolor, oznacza to, że N0 3 - został zredukowany poza N0 2 - do NH 3 i N 2, a bakteria ma zdolność do redukowania azotanów.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, kołpaki bawełniane, pętla do inokulacji, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarna, saszetka utylizacyjna, inkubator, bulion azotanowy, pył cynkowy, odczynnik azotanowy Roztwór A, odczynnik azotanowy Roztwór B, izolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki bulionowej azotanowej (zawierającej azotan jako główny składnik) lub jej gotowy proszek wymagany w 100 ml bulionu odważa się i rozpuszcza w 100 ml wody destylowanej w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml przez wstrząsanie i wirowanie ( Rysunek 7.10).

2. Jego pH określa się przy użyciu papieru lub pH-metru pH i doprowadza się do 7, 2 za pomocą 0, 1 N HCl, jeśli jest to więcej lub stosując 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy. Kolbę ogrzewa się, jeśli jest to wymagane, w celu całkowitego rozpuszczenia składników.

3. Bulion rozdziela się na pięć probówek (w przybliżeniu po 10 ml), bawełnianych, pokrytych papierem ściernym i przewiązanych nicią lub gumką.

4. Rurki bulionowe sterylizuje się w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie.

5. Rurki bulionu pozostawia się do ochłodzenia do temperatury pokojowej.

6. Bakterie testowe zaszczepia się aseptycznie, najlepiej w komorze z przepływem laminarnym, do bulionu za pomocą strzykawki inokulującej nad płomieniem bunsen. Pętla jest sterylizowana po każdej inokulacji.

7. Zaszczepione buliony bulionu inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 48 godzin w inkubatorze.

8. Do każdej probówki dodaje się 0, 5 ml roztworu azotanu, odczynnika A (zawierającego kwas sulfanilowy) i roztworu odczynnika azotanowego, roztwór B (zawierający a-naftyloaminę), dobrze wytrząsa i po 15 minutach obserwuje się zmianę koloru.

Obserwacje:

1. Powstały kolor czerwony: pozytywny wynik redukcji azotanów.

2. Nie otrzymano czerwonego koloru: dodaje się pył cynkowy.

(za) Powstały kolor czerwony: ujemny wynik redukcji azotanów.

(b) Nie otrzymano czerwonego koloru: pozytywna redukcja azotanów.