Test utleniania-fermentacji bakterii w celu ustalenia ich zdolności do wykorzystania glukozy (z rysunkiem)

Badanie fermentacji utleniania na bakteriach w celu wykrycia ich zdolności do wykorzystania glukozy tlenowo (oksydacyjnie) lub beztlenowo (fermentacyjnie)!

Zasada:

Niektóre bakterie mogą wykorzystywać glukozę. Niektóre z nich wykorzystują go tylko w obecności tlenu (tlenowo lub tlenowo), podczas gdy inne, oprócz wykorzystania tlenowego, mogą również wykorzystywać go w nieobecności tlenu (fermentacyjnie lub beztlenowo).

Zatem bakteria zdolna do fermentacji glukozy musi być w stanie ją utlenić, ale bakteria zdolna do utleniania glukozy może jej nie fermentować. Jeśli glukoza zostanie wykorzystana w dowolny sposób, powstaje kwas, który zmniejsza pH zmieniając kolor purpury bromokrezolowej z fioletowej na żółtą.

W teście utleniania-fermentacji (test O / F) bakterie testowe są hodowane tlenowo i beztlenowo osobno, w półstałych probówkach agarowych zawierających glukozę i purpurowy bromokrezol. Jeśli bakterie mają zdolność wykorzystywania glukozy, kolor pożywki zmienia się z purpurowego na żółty. Jeśli używa tlenku glukozy w warunkach tlenowych, jest utleniający i jeśli stosuje beztlenową glukozę, jest fermentacyjny.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, kołpaki bawełniane, pętelka do inokulacji, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarna, słoik utylizacyjny, inkubator, bulion glukozowy Hugh-Leif-son, ciekła parafina, izolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki bulionowej Hugh-Leifson (HLGB) (zawierającej glukozę i fiolet bromokrezolowy jako główne składniki) lub jej gotowy proszek wymagany w 100 ml bulionu odważa się i rozpuszcza w 100 ml wody destylowanej w Kolba stożkowa o pojemności 250 ml poprzez wstrząsanie i mieszanie (rysunek 7.9).

2. Jego pH określa się przy użyciu papieru lub pH-metru pH i doprowadza się do 7, 4 za pomocą 0, 1N HCl, jeśli jest on większy lub stosując 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy.

3. Po dostosowaniu pH dodaje się agar. W tym celu stosuje się mniej agar, aby uzyskać półstałe pożywki, aby ułatwić ukłucie.

4. Kolbę ogrzewa się w celu całkowitego rozpuszczenia agaru w podłożu.

5. Przed zestaleniem się podłoże w stanie ciepłego stopu rozdziela się na dwa zestawy probówek (w przybliżeniu po 5 ml); każdy zestaw ma pięć probówek.

6. Probówki są z bawełny, pokryte papierem ściernym i związane nicią lub gumką.

7. Rurki bulionowe sterylizuje się w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie.

8. Rurki bulionu pozostawia się do ochłodzenia do temperatury pokojowej.

9. Płynna parafina jest sterylizowana przez ogrzewanie w temperaturze 180 ° C przez 3 godziny w piecu z gorącym powietrzem.

10. Badane bakterie zaszczepia się aseptycznie, najlepiej w komorze z przepływem laminarnym, do wszystkich wysterylizowanych półstałych probówek bulionowych za pomocą stuknięcia za pomocą sterylizowanej płomieniowo pętli inokulacyjnej. Pętla jest sterylizowana po każdej inokulacji.

11. Sterylizowaną ciekłą parafinę delikatnie wylewa się aseptycznie do jednego zestawu zaszczepionych probówek, (około 1 cm wysokości na podłożu), aby zapewnić warunki beztlenowe.

12. Wszystkie zaszczepione buliony bulionowe inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w inkubatorze.