Test deaminizowania fenyloalaniny na bakteriach w celu ustalenia ich zdolności do odkażania aminokwasu (z rysunkiem)

Przeczytaj ten artykuł, aby zapoznać się z testem deaminizacji fenyloalaniny na bakteriach, aby dowiedzieć się o ich zdolności do deaminacji aminokwasu!

Zasada:

Niektóre bakterie mają zdolność deaminacji aminokwasu fenyloalaniny, ponieważ mogą wytworzyć enzym "deaminazę fenyloalaniny".

Enzym ten deaminuje fenyloalaninę poprzez usunięcie jej grupy aminowej, wytwarzając w ten sposób kwas fenylopirogronowy (kwas ketonowy) i amoniak (NH3). Kwas fenylopirogronowy tworzy zielony kolor z roztworem chlorku żelazowego.

W teście deaminaz fenyloalaniny bakterię testową hoduje się na skosach agarowych zawierających fenyloalaninę. Jeśli bakterie mają zdolność deaminacji fenyloalaniny, kolor skosów zmienia się z żółtego na zielony po zrzuceniu na nie roztworu chlorku żelazowego.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, bawełniane korki, pętla do inokulacji, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarna, saszetka utylizacyjna, inkubator, agar fenyloalaniny, roztwór chlorku żelazowego (10%), izolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki agarowej z fenyloalaniną (zawierającej fenyloalaninę jako główne składniki) lub jej gotowy proszek wymagany do napełnienia 100 ml pożywki są odważane i rozpuszczane w 100 ml wody destylowanej w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml poprzez wstrząsanie i wirowanie ( Rysunek 7.17).

2. Jego pH określa się przy użyciu papieru lub pH-metru pH i doprowadza się do 7, 2 za pomocą 0, 1 N HCl, jeśli jest to więcej lub stosując 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy.

3. Kolbę ogrzewa się w celu całkowitego rozpuszczenia agaru w podłożu.

4. Zanim się zestali, podłoże w stanie ciepłym stopionym rozdziela się na 5 probówek (w przybliżeniu po 20 ml).

5. Probówki są z bawełny, pokryte papierem ściernym i związane nicią lub gumką.

6. Są sterylizowane w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie.

7. Po sterylizacji są one usuwane z autoklawu i utrzymywane w pozycji skośnej w celu schłodzenia i zestalenia podłoża, tak aby uzyskać skosy agarowe fenyloalaniny.

8. Badane bakterie zaszczepia się aseptycznie, najlepiej w komorze laminarnej, za pomocą smug na powierzchni skosów za pomocą sterylizowanej płomieniowo pętli. Pętla jest sterylizowana po każdej inokulacji.

9. Zaszczepione skosy inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 24 do 48 godzin w inkubatorze.

10. Do każdego skosu dodano 4-5 kropli roztworu chlorku żelazowego (10%).

Obserwacje:

1. Kolor skosów zmieniał się. Deaminaza fenyloalaniny dodatnia.

2. Kolor skosu pozostaje żółty: deaminazy fenyloalaniny ujemne.