Przygotowanie mokrej góry bakterii do obserwowania jej naturalnego kształtu i wielkości

Staraj się przygotować mokre wierzchowce bakterii, aby obserwować ich naturalny kształt, wielkość i układ w warunkach życia.

Cel, powód:

Komórki bakterii można łatwo i wyraźnie zobaczyć, gdy są zabarwione plamami, ale w większości procesów barwienia komórki obumierają i tracą swój naturalny kształt i rozmiar dzięki utrwalaniu termicznemu, jak również dzięki ekspozycji na chemikalia (plamy, kwasy i alkohol).

Celem tego eksperymentu jest obserwacja naturalnego kształtu, wielkości i rozmieszczenia bakterii w warunkach życia. Ruchliwość nie może być obserwowana przy montażu na mokro, ponieważ komórki są ściskane pomiędzy szkiełkiem a szkiełkiem nakrywkowym.

Zasada:

W przypadku montażu na mokro kroplę zawiesiny bakterii umieszcza się na szkiełku, przykrywaną szkiełkiem nakrywkowym i obserwuje się ją pod mikroskopem złożonym lub korzystnie pod mikroskopem z ciemnym polem lub kontrastem fazowym, stosując obiektyw do zanurzania w oleju.

Wymagane materiały:

Szkiełko, szkiełko nakrywkowe, wazelina, olej immersyjny (olej z wełny cedrowej lub ciekła parafina), kultura bakteryjna (na podłożu stałym lub w zawiesinie płynnej), pętla i mikroskop (związek, ciemne pole lub kontrast fazowy).

Procedura:

1. Slajd jest prawidłowo czyszczony pod bieżącą wodą, tak aby woda nie pozostała jak krople na jego powierzchni (Rysunek 5.2).

2. Slajd suszy się, przecierając papierem z bibuły, a następnie przesuwając nad płomieniem lub utrzymując w słońcu.

3. Jeśli bakterie zostały wyhodowane na podłożu stałym (jako skośna hodowla lub hodowla płytkowa), kropla wody destylowanej umieszczona jest pośrodku szkiełka. Pętla jest sterylizowana poprzez podgrzanie jej nad płomieniem do gorąca. Jest schładzany do temperatury pokojowej. Następnie w sposób aseptyczny niewielka część kultury bakterii jest zeskrobywana przez pętlę i przenoszona do kropli wody.

Zawiesinę bakterii wytwarza się delikatnie mieszając pętlę bakterii w kropli wody, w taki sposób, że kropla nie rozprzestrzenia się. W przypadku hodowania w ciekłym ośrodku jako zawiesiny, aseptycznie kroplę zawiesiny bakterii umieszcza się bezpośrednio pośrodku szkiełka, stosując sterylizowaną płomieniowo pętlę.

4. Wokół kropli nanoszona jest wazelina lub podobny materiał, dzięki czemu, gdy szkiełko nakrywkowe pokrywa kroplę, minimalizuje się parowanie i wpływ prądu powietrza.

5. Poślizg zakrywający jest utrzymywany w pozycji pochylonej w pobliżu kropli zawiesiny bakterii, z jedną krawędzią dotykającą szkiełka.

6. Powoli opuść pokrowiec, aż dotknie powierzchni kropli.

7. Następnie, szkiełko nakrywkowe jest uwalniane, tak że kropla zawiesiny bakterii rozprzestrzenia się we wszystkich kierunkach pod szkiełkiem nakrywkowym. Należy zachować ostrożność, aby w zawiesinie nie tworzył się pęcherzyk powietrza.

8. Slajd jest przycinany na scenie mikroskopu złożonego i obserwowany przy użyciu niskiej mocy i wysokich celów suchych. Następnie kropla oleju immersyjnego nakładana jest na szkiełko nakrywkowe i obserwowana przy użyciu mikroskopu z zanurzeniem w oleju. Najlepiej jest użyć mikroskopu z kontrastem fazowym lub ciemnym polem do jasnej obserwacji.

Obserwacje (w ramach Celu zanurzenia w oleju):

1. Kształt bakterii:

Kulisty (coccus)

W kształcie pręta (pałeczki)

2. Rozmieszczenie bakterii:

Comma-like (vibrio)

Spirala (krętki)

Pary (diplobacillus / diplococcus)

W czwórce (tetradach)

W łańcuchach (streptococcus / streptobacillus)

Klastry przypominające winogrona (gronkowce)

Sześcienne (sarcinae lub oktet)

3. Rozmiar bakterii:

Oszacowując wzrok, wykonaj rysunek pola pod obiektywnym zanurzeniem w oleju.