Uwagi do studium na temat cytometrii przepływowej
Poniższy artykuł zawiera uwagi dotyczące zaawansowanej cytometrii przepływowej.
Cytometria przepływowa jest najnowszą techniką opracowaną w ciągu ostatnich dwóch dekad w celu zbadania zawartości komórek, w szczególności wydajności pakowania nuklearnego. Oprócz NPE, fizyczne i chemiczne właściwości zawartości różnych komórek i warunki patologiczne mogą być szybko analizowane z prawidłowym wnioskiem.
Cytometry przepływowe są dostępne na rynku w postaci maszyny. Maszyna składa się z układu płynów, układu optycznego do zbierania sygnałów świetlnych generowanych jako komórki przechodzące przez laser. Maszyna jest również wyposażona w układ elektroniczny, który przetwarza sygnały świetlne na proporcjonalne sygnały elektroniczne, które ostatecznie są przekształcane na postać cyfrową w celu analizy komputerowej.
Około 5000 komórek na sekundę, mierząc indywidualnie jeden po drugim, można było zeskanować z zawiesiny heterogenicznej populacji.
Wyrafinowany system Fludics wyposażony jest w lasery, optykę, elektronikę i sortowanie. System Fludics ma aktywowany fluorescencyjny sorter komórek (system płynów FACS Calibur), podczas sortowania może sortować dokładność zliczeń pojedynczych komórek.
Rezultatem jest wysoka czystość z odzyskiem, które spada między pojedynczą komórką a odzyskiem. Jest sterowany elektronicznie za pomocą trzech przycisków do wyboru trybu pracy PRIME, STAND BY i RUN. Stawka jest kontrolowana jako wysoka; (60 ul / min.), Średni (35 ul / min) i niski (12 ul / min).
Wzmocnienie i emisja, fluorochromy, filtry i kompensacja kolorów stanowią ważną część wyposażenia. Filtr 530/30 BP mierzy sygnały emitowane przez izocyjanian Fluorescence (Stain). Jeśli stosuje się fikoerytrynę i jodek Popidium, stosuje się filtr 585/42 BP. 650 filtrów LP są używane, jeśli generowane są peridinin Chlorophyll i 7-Amino-Actinomycin D Signal.
Sygnały laserowe są odczytywane przez oprogramowanie do zadań komórek Becton Dickinson. Detektor fluorescencyjny i filtry pasmowe należy dostosować zgodnie z instrukcją i wymaganiami przyrządu. 488 nm Źródła światła laserowego Argon i filtr pasmowy 623 nm są powszechnie obecne w sprzęcie.
Ma również system do wyświetlania danych i analizy. Ważnymi parametrami są histogramy, dane wieloparametrowe oraz dane dotyczące trybu listy i bramkowania. Analiza maszynowa danych za pomocą dostarczonego oprogramowania daje histogramy zawartości DNA w funkcji liczby, które są automatycznie wyświetlane na komputerze (49.2).
Zastosowania cytometru przepływowego są liczne i są dobrodziejstwem dla badań biologicznych i badań klinicznych wielu chorób ludzi. Cytometr przepływowy służy do badania linii krwi w tkance hemopoetycznej w komórkach nerki w głowie oddychających ryb.
Łatwo można odróżnić pluripotencjalne hematopoetyczne komórki macierzyste od fenotypu dojrzałej funkcjonalnej, obwodowej populacji limfocytów. Znaczącym zastosowaniem tego sprzętu jest zbadanie apoptozy lub śmierci komórki, a także zbadanie nekrozy komórki z powodu toksyczności pestycydów.
Ze względu na szerokokątne sygnały rozproszone możliwe jest usunięcie limfocytów, monocytów i granulocytów z rozłożonej próbki krwi pełnej. Możliwe jest także oddzielenie płytek krwi od szumu tła. Jest on stosowany do układu odpornościowego i immunofenotypowania. Służy do badania białaczki i chłoniaka, badań transplantacyjnych, wyliczania retikulocytów i analizy zawartości DNA komórkowego.
Ze względu na mechanizm przetwarzania impulsów, jest to korzystne w analizie cyklu komórkowego DNA. Analiza NPE jest stosowana do różnicowania pierwotnego raka piersi i przerzutów, pierwotnego raka okrężnicy i przerzutów okrężnicy, a także raka żołądka i jajnika (ryc. 49.2).
Stosowany protokół jest taki, że pierwsze komórki zostały usunięte i utrwalone w 3% paraformaldehydzie. Są one permeabilizowane za pomocą 0, 5% Tritonu x 100. Jądrowy DNA znakowano następnie jodkiem popidium po traktowaniu RNazą, stosując zestaw DNA Test Plus z cyklu.