Test uodpornienia bakterii na ich zdolność do moczenia w moczu (z rysunkiem)

Test ureazy na bakteriach, aby dowiedzieć się ich zdolności do moczenia moczu (z rysunkiem)!

Zasada:

Niektóre bakterie mają zdolność hydrolizowania (rozbicia w obecności wody) mocznika na NH3 i CO2, ponieważ mogą wytworzyć enzym "ureazę".

NH ₃ jest zasadowy (zasadowy), dzięki czemu zwiększa pH zmieniając kolor czerwieni fenolowej z żółtego na różowy.

W teście ureazowym bakterie testowe hoduje się na skosach agarowych zawierających mocznik i czerwień fenolową. Jeśli bakterie mają zdolność hydrolizowania mocznika, kolor pożywki zmienia się z żółtego na różowy. Niektóre bakterie mogą wytwarzać NH3 poprzez rozkładanie peptonów w podłożu. W takich przypadkach uzyskuje się fałszywie dodatni wynik.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, bawełniane zatyczki, igła do zaszczepiania, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarnego przepływu, saszetka utylizująca, inkubator, aparat do filtracji membranowej, agar mocznikowy, izolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Pięć probówek jest z bawełny, pokrytych papierem ściernym i przewiązanych nitką lub gumką (rysunek 7.15).

2. Składniki pożywki agarowej z mocznikiem (zawierającej mocznik jako główny składnik) lub gotowy proszek (z wyjątkiem mocznika) wymagane dla 100 ml pożywki są odważane i rozpuszczane w 90 ml wody destylowanej w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml drżenie i wirowanie.

3. Wartość pH ustala się za pomocą papieru lub pH-metru pH i dostosowuje się do 6, 9 za pomocą 0, 1 N HCl, jeśli jest on większy lub stosuje 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy.

4. Kolbę ogrzewa się w celu całkowitego rozpuszczenia agaru w podłożu.

5. Kolba jest bawełniana, pokryta papierem ściernym i przewiązana nicią lub gumką.

6. Pięć probówek i kolba stożkowa zawierająca agar z mocznikiem (z wyjątkiem mocznika) sterylizuje się w autoklawie w temperaturze 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut.

7. Po sterylizacji są one usuwane z autoklawu i pozostawione do ostygnięcia przez jakiś czas, nie dopuszczając do zestalenia się ośrodka. Chłodzenie ośrodka zapobiega kondensacji i gromadzeniu się kropel wody na skosach. Jeśli podłoże zostało już przygotowane i zestalone podczas przechowywania, musi zostać upłynnione przez ogrzewanie ostrożnie, aż całkowicie się rozpuści.

8. 20% roztwór mocznika przygotowuje się rozpuszczając 20 gramów mocznika w 100 ml wody destylowanej i sterylizuje się go za pomocą urządzenia do filtracji membranowej, ponieważ mocznik nie może być sterylizowany ciepłem, ponieważ rozkłada się po ogrzaniu.

9. 10 ml sterylizowanego roztworu mocznika miesza się aseptycznie z 90 ml wysterylizowanego schłodzonego skroplonego medium (skroplonego przez ogrzewanie).

10. Przed zestaleniem się podłoże, w stanie ciepłego stopu, rozprowadza się aseptycznie w 5 sterylizowanych probówek z waty bawełnianej (w przybliżeniu po 20 ml).

11. Probówki są utrzymywane w pozycji skośnej, aby schłodzić i zestalić podłoże, aby uzyskać skosy agarowe z mocznikiem.

12. Badane bakterie inokuluje się aseptycznie, korzystnie w komorze z przepływem laminarnym, w skosy przez wbijanie w kolbę i smugi na powierzchni skosów za pomocą sterylizowanej płomieniem igły. Igła jest sterylizowana po każdej inokulacji.

13. Zaszczepione skosy inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w inkubatorze.

Obserwacje:

1. Wytworzony kolor różowy: Ureak pozytywny.

2. Nie otrzymano różowego koloru: ujemny ujemny.