Voges-Proskauer Eksperyment na bakteriach, aby znaleźć ich zdolność do wykorzystania glukozy (z rysunkiem)

Przeczytaj ten artykuł, aby zapoznać się z testem Voges-Proskauer (test VP) na bakteriach, aby dowiedzieć się, jak wykorzystać glukozę do produkcji acetylometylokarbinolu!

Zasada:

Niektóre bakterie mogą wykorzystywać glukozę i przekształcać ją w acetylometylokarbinol (acetoinę), który jest neutralnym końcowym produktem.

Bakterie te początkowo metabolizują glukozę do kwasu pirogronowego, który jest dalej metabolizowany przez metaboliczny pośredni kwas octowy do acetylometylokarbinolu (acetoiny) i C02 poprzez "szlak glikolu butylenowego".

Acetylometylokarbinol utlenia się do diacetylu w obecności a-naftolu w warunkach alkalicznych (40% KOH). Diacetyl reaguje z guanidynową grupą kreatyny (z peptonu stosowanego w pożywce hodowlanej), aby uzyskać różowy róż.

W teście Vogesa-Proskauera (test VP) bakterie testowe hoduje się w bulionie zawierającym glukozę. Jeśli bakterie mają zdolność wykorzystywania glukozy z wytwarzaniem acetylometylokarbinolu (acetoiny) jako neutralnego produktu końcowego, bulion nabiera różowo-różowego koloru po dodaniu roztworu a-naftolu, a następnie 40% KOH.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, bawełniane zatyczki, pętla do inokulacji, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarna, saszetka utylizacyjna, inkubator, bulion MR-VP (lub bulion fosforanu glukozy), roztwór VP I (roztwór A odczynnika Barritt i roztwór VP II (Barritt's roztwór odczynnika B), wyizolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki bulionowej MR-VP (zawierającej glukozę jako główny składnik) lub jej gotowy proszek wymagany w 100 ml bulionu odważa się i rozpuszcza w 100 ml wody destylowanej w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml przez wstrząsanie i wirowanie (rysunek 7.5). Można również użyć bulionu do testu czerwieni metylowej. Zwykle ten sam bulion jest wykorzystywany w obu testach (MR i VP) w tym samym czasie.

2. Jego pH określa się za pomocą papieru lub pH-metru pH i dostosowuje się do 6, 9 za pomocą 0, 1N HCl, jeśli jest on większy lub stosując 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy. Kolbę ogrzewa się, jeśli jest to wymagane, w celu całkowitego rozpuszczenia składników.

3. Bulion rozdziela się na pięć probówek (w przybliżeniu po 10 ml), bawełnianych, pokrytych papierem ściernym i przewiązanych nicią lub gumką.

4. Rurki bulionowe sterylizuje się w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie.

5. Rurki bulionu pozostawia się do ochłodzenia do temperatury pokojowej.

6. Bakterie testowe zaszczepia się aseptycznie, najlepiej w komorze z przepływem laminarnym, do bulionu za pomocą strzykawki inokulującej nad płomieniem bunsen. Pętla jest sterylizowana po każdej inokulacji.

7. Zaszczepione probówki bulionowe inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 48 do 72 godzin w inkubatorze.

8. Roztwór VP I (zawierający a-naftol) wrzuca się do probówek bulionowych (po 0, 2 ml) i dokładnie miesza.

9. Roztwór VP II (zawierający KOH) wkraplano do probówek bulionowych (0, 6 ml każdy), dokładnie mieszano i odstawiono na 30 minut do 2 godzin.