Biologiczne metody oceny leków

Gdy fizyczne lub chemiczne metody oceny lub ilość próbki są bardzo małe, nie są w stanie uzyskać satysfakcjonujących rezultatów w przypadku leków, wówczas leki ocenia się za pomocą biologicznych metod oceny. Metody te są wykonywane na żywych zwierzętach, izolując żywy narząd i tkankę, preparat zwierzęcy i mikroorganizm. Biologiczne metody oceny są wykonywane na żywym organizmie nazywane testem biologicznym lub testem biologicznym.

Następująca metoda jest używana jako:

1. Działanie przeciwzapalne leków

2. Działanie przeciwgorączkowe leków

3. Działanie przeciwcukrzycowe leków

4. Działanie przeciwbólowe leków

5. Aktywność leków przeciwwrzodowych

6. Działanie przeciwrobacze leku: są wykonywane na robakach

7. Aktywność serca leku: glikozydy nasercowe są oceniane na żabie i gołębie

8. Metody mikrobiologiczne: żywe bakterie, drożdże i pleśnie są wykorzystywane do oznaczania witamin i określania aktywności antybiotyków.

Działanie przeciwzapalne leku:

Metoda obrzęku łapy:

Stosuje się samce lub samice szczurów Sprague-Dawley o masie ciała od 100 do 150 g. Zwierzęta są głodzone przez noc. Aby zapewnić równomierne nawodnienie, szczury otrzymują 5 ml wody przez zgłębnik żołądkowy (kontrole) lub testowany lek rozpuszczony lub zawieszony w tej samej objętości. Trzydzieści minut później szczurom poddaje się podskórne wstrzyknięcie 0, 05 ml 1% roztworu karragenów an do podeszwowej strony lewej tylnej łapy. Łapa jest oznaczona tuszem na poziomie kostki bocznej i zanurzona w rtęci aż do tego znaku.

Objętość łapy mierzy się pletyzmograficznie bezpośrednio po wstrzyknięciu, ponownie 3 i 6 godzin, a ostatecznie 24 godziny po prowokacji. Wzrost objętości łapy po 3 lub 6 godzinach jest obliczany jako procent w porównaniu z objętością mierzoną bezpośrednio po wstrzyknięciu środka drażniącego dla każdego zwierzęcia.

Skutecznie leczone zwierzęta wykazują o wiele mniej obrzęków. Różnica średnich wartości pomiędzy leczonymi zwierzętami i grupami kontrolnymi jest obliczana dla każdego przedziału czasowego i statystycznie oceniana. Różnice w różnych przedziałach czasu dają pewne wskazówki dotyczące czasu działania przeciwzapalnego. Krzywkę dawka-odpowiedź prowadzi się dla aktywnych leków i można oznaczyć wartości ED50.

Metoda ziarniniaka wełny:

Samce szczurów o średniej wadze 200 g znieczulono eterem. Tylną skórę goli się i dezynfekuje 70% etanolem. Nacięcie wykonuje się w okolicy lędźwiowej. Przez stępione szczypce tworzą się podskórne tunele, a wysterylizowany granulat bawełny umieszcza się po obu stronach w regionie szkaplerza.

Peletki są standaryzowane do użytku w stomatologii ważącej 20 mg lub granulki utworzone z surowej bawełny, które powodują bardziej wyraźne zapalenie niż bielona bawełna. Zwierzęta traktuje się przez 7 dni podskórnie lub doustnie.

Następnie zwierzęta uśmierca się, peletki wytwarza się i suszy, aż masa pozostanie stała. Określa się suchą masę netto, tj. Po odjęciu masy peletki bawełnianej. Oblicza się średnią masę peletek z grupy kontrolnej, jak również z grupy testowej. Oblicza się procentową zmianę masy ziarniaków w stosunku do grupy kontrolnej nośnika.

Działanie przeciwgorączkowe leku:

Można stosować króliki obu płci i różnych szczepów o masie ciała od 3 do 5 kg. Zwierzęta umieszcza się w odpowiednich klatkach i do odbytnicy wprowadza się termopary połączone z automatycznym rejestratorem. Zwierzęta można dostosować do klatek na 60 minut.

Następnie 0, 2 ml / kg zawierającego 0, 2 μg lipopolisacharydu wstrzykuje się dożylnie do ucha królika. Sześćdziesiąt minut później badany związek podaje się podskórnie lub doustnie. Temperatura ciała jest monitorowana przez co najmniej 3 godziny.

Spadek temperatury ciała o co najmniej 0, 5 ° C przez ponad 30 minut w porównaniu z wartością temperatury przed podaniem badanego związku uważa się za pozytywny efekt. Ten wynik stwierdzono po podskórnym podaniu 45 mg / kg fenylbutazonu lub podskórnie 2, 5 mg / kg mc.

Działanie przeciwcukrzycowe leków:

Cukrzyca wywołana streptozotocyną:

Samcom szczurów o masie 150-220 g karmionych standardową dietą wstrzyknięto dożylnie streptozotocynę 60 mg / kg (Calbiochem). Podobnie jak w przypadku alloksanu obserwuje się trzy fazy zmian stężenia glukozy we krwi. Początkowo stężenie glukozy we krwi wzrasta, osiągając wartości 150-200 mg% po 3 godzinach. Sześć osiem godzin po streptozotocynie wartości insuliny w surowicy zwiększa się do 4 razy, co powoduje fazę hipoglikemiczną, po której następuje uporczywa hiperglikemia. Nasilenie i początek objawów cukrzycy zależy od dawki streptozotocyny.

Po podaniu dożylnym w dawce 60 mg / kg. Objawy pojawiają się już po 24-48 godzinach z hiperglikemią do 800 mg%, glukozurią i ketonemią. Histologicznie komórki beta są degranulowane lub nawet martwicze. Stan stacjonarny osiąga się po 10-14 dniach, co pozwala na wykorzystanie zwierząt do badań farmakologicznych.

Alkohol indukowany cukrzycą: Króliki o masie 2, 0 do 3, 5 kg są podawane przez żyłę uszną za pomocą 150 mg / kg monohydratu alloksanu (5, 0 g / 100 ml, pH 4, 5) przez 10 minut, co powoduje, że 70% zwierząt staje się hiperglikemiczne i urykozerwicowe. Pozostałe zwierzęta albo umierają, albo tylko tymczasowo hiperglikemicznie.

Działanie przeciwbólowe leku:

Metoda Hot Plate:

Grupy 10 myszy obu płci o początkowej wadze 18 do 22 g są stosowane dla każdej dawki. Gorąca płyta dostępna w handlu składa się z elektrycznie podgrzewanej powierzchni. Temperaturę reguluje się w zakresie 55 ° do 56 ° C. Może to być płyta miedziana lub podgrzewana powierzchnia szklana. Zwierzęta umieszcza się na gorącym talerzu i czas do likania lub skoków jest rejestrowany przez stoper. Opóźnienie rejestruje się przed i po 20, 60 i 90 minutach po doustnym lub podskórnym podaniu wzorca lub badanego związku.

Test zanurzenia ogona:

Wykorzystano młode samice szczurów Wister (o masie ciała 170-210 g). Umieszczono je w indywidualnych klatkach ograniczających, pozostawiając ogon swobodnie zwisający. Zwierzęta można dostosować do klatek na 30 minut przed testowaniem. Dolna część 5 cm ogona jest zaznaczona. Ta część ogona zanurzona jest w filiżance świeżo wypełnionej wody o temperaturze dokładnie 55 ° C. W ciągu kilku sekund szczur reaguje, wycofując ogon. Czas reakcji rejestrowany jest w jednostkach 0, 5 s przez stoper. Po każdym oznaczeniu ogon jest dokładnie suszony.

Czas reakcji określa się przed i okresowo po podaniu doustnym lub podskórnym badanej substancji, np. Po 0, 5, 1, 2, 3, 4 i 6 godzinach. Czas odcięcia zanurzenia wynosi 15 sekund. Czas odstawienia nieleczonych zwierząt wynosi od 1 do 5, 5 s. Dlatego czas wycofania wynoszący więcej niż 6 sekund uważa się za odpowiedź pozytywną.

Metoda klipsa ogonowego Heffnera:

Zacisk tętnicy nakłada się na nasadę ogona myszy i rejestruje się czas reakcji. Stosuje się męskie myszy (szczep Charles River lub inne szczepy) o masie pomiędzy 18 a 25 g. Grupa kontrolna składa się z 10 myszy. Badane związki podaje się podskórnie karmionym myszom lub doustnie zwierzętom na czczo. Grupy testowe i grupa kontrolna składają się z 7-10 myszy.

Lek podaje się 15, 30 lub 60 minut przed badaniem. Zacisk tętnicy jest nakładany na nasadę ogona (około 1 cm od ciała) w celu wywołania bólu. Zwierzę szybko reaguje na ten szkodliwy bodziec, gryząc zacisk lub ogon w pobliżu miejsca klipsa. Czas między początkiem stymulacji a reakcją jest mierzony stoperem w przyrostach co 1/10 sekund.

Aktywność przeciwwrzodowa :

Podwiązanie odźwiernika u szczurów (Shay Rat):

Samice szczurów Wister o wadze 150-170 g głodzono przez 48 godzin, mając dostęp do wody pitnej ad libitum. W tym czasie są one trzymane pojedynczo w klatkach z uniesionymi spodami z szerokiej siatki drucianej, aby uniknąć kanibalizmu i koprofagii. Dziesięć zwierząt stosuje się na dawkę i jako kontrole. Pod znieczuleniem eterowym wykonuje się środkowe nacięcie brzucha. Odźwiernik jest legowany, uważając, aby nie uszkodzić krwi.

Brak dostawy lub trakcji na odźwierniku. Chwytając brzuch za pomocą instrumentów, należy go skrupulatnie unikać; inaczej owrzodzenie będzie niezmiennie rozwijać się w takich punktach. Ściana brzucha jest zamknięta szwami. Badane związki są podawane doustnie przez zgłębnik lub wstrzykiwane podskórnie.

Zwierzęta umieszczono na 19 godzin w plastikowych cylindrach o wewnętrznej średnicy 45 mm, zamykanych na obu końcach siatką drucianą. Następnie zwierzęta uśmierca się w znieczuleniu CO ₂ . Brzuch jest otwarty i podwiązanie umieszcza się wokół przełyku blisko przepony.

Żołądek usunięto, a zawartość odsączono w probówce wirówkowej. Wzdłuż większej krzywizny żołądek zostaje otwarty i przypięty na talerzu korkowym. Błonę śluzową bada się za pomocą mikroskopu stereoskopowego. U szczura górne dwie piąte żołądka tworzą żwacz o nabłonku łuskowatym i posiadają niewielkie mechanizmy ochronne przeciwko żrącym działaniom soku żołądkowego.

Poniżej ograniczającego grzbietu, w gruczołowej części żołądka, mechanizmy ochronne są lepsze w błonie śluzowej podłoża dwie piąte żołądka niż w najniższej części, tworząc antrum.

Dlatego zmiany występują głównie w żwaczu i w żołędzie. Liczba owrzodzeń jest odnotowywana, a ostrość rejestrowana z następującymi wynikami:

. 0 = brak owrzodzenia

. 1 = powierzchowne wrzody

. 2 = głębokie wrzody

. 3 = perforacja.

Mierzy się objętość treści żołądkowej. Po odwirowaniu, kwasowość oznacza się przez miareczkowanie 0, 1 n NaOH.

Ocena:

Wskaźnik UI wskaźnika wrzodu jest obliczany:

UI = UN + US + UP x 10-1

ja. UN = średnia liczba owrzodzeń na zwierzę

ii. US = średnia oceny punktowej

iii. UP = odsetek zwierząt z wrzodami

Wskaźnik wrzodu i kwasowość treści żołądkowej leczonych zwierząt porównuje się z kontrolami. Stosując różne dawki, można określić krzywe dawka-odpowiedź dla tworzenia owrzodzenia i wydzielania kwasu żołądkowego. Wartości ID50 można obliczyć za pomocą analizy rzetelności, przy czym 0% odpowiada wartości "nie" i "100%" na maksymalną stymulowaną wydajność kwasu żołądkowego.

Owrzodzenie stresu poprzez stres unieruchamiający:

Stosuje się grupy 10 samic szczurów Wister na dawkę badanego leku i dla kontroli ważących 150-170 g. Jedzenie i woda są pobierane na 24 godziny przed eksperymentem. Po doustnym lub podskórnym podaniu badanego związku lub roztworu placebo zwierzęta lekko znieczulono eterem.

Zarówno kończyny dolne, jak i górne są ze sobą połączone, a zwierzęta są owinięte drutem. Są one zawieszone poziomo w ciemności w 20 ° C przez 24 godziny i ostatecznie uśmiercone w znieczuleniu CO2. Żołądek usuwa się, umieszcza na talerzu korkowym, a liczbę i ciężkość wrzodów rejestruje się za pomocą mikroskopu stereoskopowego, stosując następujące wyniki:

.0 = brak owrzodzenia

.1 = powierzchowne wrzody

.2 = głębokie wrzody.

.3 = perforacja

Ocena

Wskaźnik UI wskaźnika wrzodu jest obliczany:

UI = UN + US + UP x 10-1

UN - średnia liczba owrzodzeń na zwierzę.

US = średnia oceny punktowej.

UP - procent zwierząt z owrzodzeniami