Różne substancje chemiczne i media używane w laboratorium mikrobiologicznym

Różne substancje chemiczne i media używane w Laboratorium Mikrobiologicznym!

W laboratorium bakterie są uprawiane na bogatych w substancje odżywcze substancjach zwanych "mediami". Różne nośniki są również wymagane do konkretnych zastosowań.

Składniki pożywki waży się w danej proporcji, miesza w wymaganej ilości wody i sterylizuje w autoklawie. Bakterie są zaszczepiane i mogą rosnąć.

Ważenie składników mediów jest żmudną pracą, a niektóre składniki mogą być nieświadomie pominięte. Aby przezwyciężyć tę trudność, dostępne są obecnie gotowe media w postaci proszku.

Te media zawierają wszystkie składniki w określonych proporcjach. Do określonej ilości sproszkowanego medium (jak wspomniano na etykiecie opakowania), dodaje się określoną ilość wody i sterylizuje.

Nośniki kultury są następujących typów:

I. Chemicznie zdefiniowane media:

Chemicznie zdefiniowane media lub media syntetyczne to media, w których można określić wszystkie określone substancje chemiczne (cząsteczki i atomy) i ich stężenia. Chemikalia mogą obejmować H20, NaCl, Na2S04, KCl i agar. Przykłady: nieorganiczny bulion syntetyczny, bulion z solą glukozową.

II. Złożone media:

Nośnikami złożonymi są media, w których nie można określić wszystkich określonych substancji chemicznych (cząsteczek i atomów) i ich stężenia. W przypadku wybrednych bakterii w mediach stosuje się niewiele substancji złożonych, takich jak ekstrakt wołowy, ekstrakt drożdżowy i pepton, których dokładny skład chemiczny (cząsteczki i atomy) znacznie się różni i nie jest znany. Te media są używane głównie do obfitego wzrostu bakterii. Przykłady: bulion odżywczy i agar odżywczy.

III. Specjalistyczne media:

Te media są wykorzystywane do określonych celów, a nie tylko do wzrostu bakterii.

W zależności od celu użycia, są one następujące:

1. Selektywne media:

Są to pożywki zawierające specyficzną kompozycję składników, która wspomaga wzrost niektórych docelowych bakterii i hamuje wzrost innych. Służą do izolowania określonych grup bakterii.

Kiedy konkretna grupa bakterii rośnie w podłożu selektywnym, przejawia typowe cechy kolonii, które pomagają w jej wykryciu i wyliczeniu w różnych próbkach. Konkretne bakterie, które zostały znalezione jako izolowane kolonie, są brane do dalszych testów w celu potwierdzenia identyfikacji. Czasami media selektywne są również używane jako media różnicowe.

Przykłady selektywnych mediów podano poniżej:

(a) Agar MacConkey:

Stosuje się go do hodowania gram ujemnych gatunków bakterii. Fiolet krystaliczny zastosowany w pożywce hamuje wzrost bakterii Gram-dodatnich, jednocześnie umożliwiając wzrost gatunków Gram-ujemnych.

(b) Agar EMB:

Erozinowy agar z błękitem metylenowym (agar EMB) służy do hodowli gram ujemnych gatunków bakterii. Częściowo hamuje rozwój bakterii Gram-dodatnich, dzięki czemu gram-ujemne gatunki bakterii rosną w nim obficie. Jest również stosowany w identyfikacji enterycznej postaci coli Escherichia coli, która rośnie na niej jako niebiesko-czarne kolonie o metalicznym zielonym połysku.

Inne bakterie jelitowe, takie jak Enterobacter aerogenes, rosną na nim jako grube, śluzowate, różowe kolonie. Poza tymi laktozowymi fomentrami, nie rosną na nim także laktoza-nie-fomentanty, ale jako bezbarwne kolonie, dla których przyjmują purpurowy kolor pożywki.

(c) Agar z solą mannitolową:

Jest stosowany do wzrostu Staphylococcus spp. Wysokie stężenie soli (7, 5% NaCl) obecne w pożywce hamuje wzrost większości innych bakterii. Wyróżnia on również Staphylococcus w fermentującym mannitol Staphylococcus, który rośnie w żółtych strefach otaczających kolonie i niefermentujący Staphylococcus mannitol, który rośnie bez zmiany zabarwienia.

2. Media różnicowe:

Są to media, na których różne bakterie rosną jako kolonie, o różnych cechach wizualnych.

Przykłady mediów różnicowych podano poniżej:

(a) Agar MacConkey:

Na tym podłożu niepatogenne normalne bakterie jelitowe, które są fermentorami laktozy, rosną jako czerwone kolonie, podczas gdy patogenne bakterie jelitowe, które są niefermenterami laktozy, rosną jako bezbarwne kolonie.

(b) Agar z krwią:

Krew jest ważnym składnikiem tego medium. Jest to składnik wzbogacający dla wybrednych bakterii, takich jak Streptococcus spp.

Stosuje się go do różnicowania właściwości paciorkowców w celu wytworzenia różnych rodzajów hemolizy krwi w następujący sposób:

(i) hemoliza α:

W tym przypadku dochodzi do częściowego zniszczenia krwinek czerwonych, co powoduje powstanie zielonych stref wokół kolonii spowodowanych zmniejszeniem stężenia hemoglobiny do methemoglobiny.

(ii) β-hemoliza:

W tym przypadku dochodzi do całkowitej hemolizy krwinek czerwonych, co powoduje powstanie jasnej strefy wokół kolonii. W wyniku tej hemolizy powstają dwa rodzaje hemolizyn, mianowicie "streptolizyna O", która jest antygenowym enzymem nietrwałym dla tlenu i "streptolizyną S", która jest nieantygeniczną, stabilną wobec tlenu lizą.

(iii) hemoliza y:

W tym przypadku nie występuje hemoliza, co powoduje brak strefy wokół kolonii.

3. Transport Media:

Są to media używane do krótkotrwałego transportu bakterii, podczas których wzrost jest niepożądany. Takie media zawierają tylko bufor i sól. Media nie zawierają żadnego źródła C, N i innych czynników wzrostu. Zapobiega wzrostowi drobnoustrojów.

4. Media wzbogacające:

Są to media, w których względna proporcja docelowych bakterii jest wzbogacona, ponieważ zawierają one składniki odżywcze dla docelowych bakterii, podczas gdy żadna dla innych. Na przykład masa kałowa zawiera bardzo małą liczbę Salmonelli i Shigella.

Aby je wyizolować, najpierw hoduje się je w bulionie seleninowym lub bulionie GN (gram-ujemnym), w którym tylko Salmonella i Shigella będą rosły obficie, podczas gdy inne nie będą rosły i pozostaną w fazie opóźnienia. Następnie na nośnikach stałych nanosi się pasma w celu uzyskania kolonii Salmonelli i Shigella.

5. Wzbogacone media:

Są to media używane do wspierania rozwoju maksymalnych rodzajów bakterii.

6. Środki biochemiczne:

Te media służą do testowania aktywności biochemicznej bakterii, które pomagają w ich identyfikacji. Poniżej przedstawiono listę ważnych nośników biochemicznych wykorzystywanych w testach biochemicznych przeprowadzanych w celu identyfikacji różnych bakterii.