Dostarczony wodór test na bakterie, aby sprawdzić ich zdolność do produkcji wodoru (z rysunkiem)

Przeczytaj ten artykuł, aby zapoznać się z testem wodorowym na bakteriach, aby dowiedzieć się, czy potrafią wytwarzać wodór!

Zasada:

Niektóre bakterie mają zdolność redukcji siarki do siarkowodoru. Jest to bezbarwny gaz, który reaguje z żelazem (sole żelazawe) w celu wytworzenia czarnych osadów siarczku żelazawego.

Reaguje również z octanem ołowiu w celu wytworzenia czarnych osadów siarczku ołowiu. Test na siarkowodór (test H, S) można przeprowadzić na dwa sposoby, w oparciu o źródło siarki.

Są one następujące:

(ja) Test H ₂ S z wykorzystaniem nieorganicznego źródła siarki

(ii) Test H ₂ S z wykorzystaniem organicznego źródła siarki

(i) Test H ₂ S wykorzystujący nieorganiczne źródło siarki:

W teście tym bakterie testowe są hodowane na skosach z agaru z potrójnym cukrem (skosy agaru TSI), które zawierają glukozę, sacharozę, laktozę, czerwień fenolową, tiosiarczan sodu i siarczan żelazawy. Jeśli bakterie wykorzystują nieorganiczną siarkę (tiosiarczan sodu) stosowaną w pożywce, powstaje H ₂ S, który łączy się z siarczanem żelaza w środowisku, tworząc czarne osady siarczku żelazawego, powodując zmianę zabarwienia kolby na czerń .

Poza wykorzystaniem siarki nieorganicznej, jeśli bakterie mogą wykorzystywać którykolwiek z trzech cukrów (glukoza, sacharoza lub laktoza), wytwarza się kwas, który zmniejsza pH pożywki. W rezultacie kolor skosu zmienia się z czerwonego na żółty.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, bawełniane zatyczki, igła do zaszczepiania, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarna, słoik utylizacyjny, inkubator, agar z potrójnie cukrowym żelem (agar TSI), izolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki agarowej TSI (zawierającej 3 cukry i żelazo jako główne składniki) lub gotowy proszek wymagany dla 100 ml pożywki są odważane i rozpuszczane w 100 ml wody destylowanej w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml wytrząsanie i mieszanie (rysunek 7.13).

2. Jego pH określa się przy użyciu papieru lub pH-metru pH i doprowadza się do 7, 4 za pomocą 0, 1N HCl, jeśli jest on większy lub stosując 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy.

3. Kolbę ogrzewa się w celu całkowitego rozpuszczenia agaru w podłożu.

4. Zanim się zestali, podłoże w stanie ciepłym stopionym rozdziela się na 5 probówek (w przybliżeniu po 20 ml).

5. Probówki są z bawełny, pokryte papierem ściernym i związane nicią lub gumką.

6. Są sterylizowane w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie.

7. Po sterylizacji są one usuwane z autoklawu i utrzymywane w pozycji skośnej w celu schłodzenia i zestalenia podłoża, tak aby uzyskać skosy agaru TSI.

8. Badane bakterie zaszczepia się w warunkach aseptycznych, najlepiej w komorze z przepływem laminarnym, w skosy przez wbicie w tyłek i smugi na powierzchni skosów za pomocą sterylizowanej płomieniem igły. Igła jest sterylizowana po każdej inokulacji.

9. Zaszczepione skosy inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w inkubatorze.

Obserwacje:

1. Kolor zmian doczołowych na czarny: H ₂ S pozytywny.

2. Kolor tyłka nie zmienia się na czarny: H2 ujemny.

(ii) Test H ₂ S z użyciem organicznego źródła siarki

W teście tym bakterie testowe hoduje się w bulionie cysteinowym, który zawiera cysteinę jako organiczne źródło siarki. Jeżeli bakteria wykorzystuje organiczną siarkę (cysteinę) stosowaną w pożywce za pomocą swojego enzymu "odsiarczan cysteiny", wytwarza się H2S. Ta H2S łączy się z octanem ołowiu moczonym w papierze, tworząc czarne osady siarczku ołowiu, powodując zmianę barwy papieru na czerń.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, bawełniane zatyczki, pętla do inokulacji, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarna, saszetka utylizacyjna, inkubator, bulion cysteinowy, paski papierowe z bibuły Whatman, roztwór octanu ołowiu (nasycony), wyizolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki bulionowej cysteiny (zawierającej cysteinę jako główny składnik) lub jej gotowy proszek wymagany w 100 ml bulionu odważa się i rozpuszcza w 100 ml wody destylowanej w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml przez wstrząsanie i wirowanie ( Rysunek 7.14).

2. Jego pH określa się przy użyciu papieru lub pH-metru pH i doprowadza się do 7, 5 za pomocą 0, 1N HCl, jeśli jest on większy lub stosując 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy. Kolbę ogrzewa się, jeśli jest to wymagane, w celu całkowitego rozpuszczenia składników.

3. Bulion rozdziela się na pięć probówek (w przybliżeniu po 10 ml), bawełnianych, pokrytych papierem ściernym i przewiązanych nicią lub gumką.

4. Rurki bulionowe sterylizuje się w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie.

5. Rurki bulionu pozostawia się do ochłodzenia do temperatury pokojowej.

6. Badane bakterie zaszczepia się aseptycznie, najlepiej w komorze z przepływem laminarnym, za pomocą pętli inokulacyjnej wysterylizowanej na płomieniu bunsen. Pętla jest sterylizowana po każdej inokulacji.

7. Mały pasek papieru moczonego w roztworze octanu ołowiu (nasycony) jest zamocowany przy wylocie każdej probówki testowej w taki sposób, że długa jej część pozostaje wewnątrz probówki testowej, a mała część pozostaje na zewnątrz.

8. Zaszczepione buliony bulionu inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 48 godzin w inkubatorze.