Potrójny Test Żelaza na Bakterie, aby dowiedzieć się o zdolności do produkcji siarkowodoru (z rysunkiem)

Przeczytaj ten artykuł, aby zapoznać się z testem potrójnego cukru na obecność bakterii, aby dowiedzieć się, jak produkować siarkowodór!

Celem przeprowadzenia testu potrójnego cukru cukrowego (test TSI), aby sprawdzić zdolność bakterii do wykorzystania jednego lub więcej z trzech cukrów, takich jak glukoza, sacharoza i laktoza, jak również jego zdolności do wytwarzania siarkowodoru (H2 S), który redukuje żelazo.

Zasada:

Niektóre bakterie mogą wykorzystywać jeden lub więcej z trzech cukrów, takich jak glukoza, sacharoza i laktoza.

Jeśli wykorzystuje się jeden lub więcej z trzech cukrów (potrójnych cukrów), wytwarza się kwas, który zmniejsza pH zmieniając kolor czerwieni fenolowej z czerwonego na żółty.

Ponadto niektóre bakterie mają zdolność do wytwarzania siarkowodoru (H ₂ S) poprzez wykorzystanie związków siarki. Tak wytworzony H2S łączy się ze związkiem żelaza, siarczanem żelazawym, tworząc czarne osady siarczku żelazawego.

W teście z potrójnym cukrem żelaza (test TSI) bakterie testowe hoduje się na skosach agarowych zawierających glukozę, sacharozę, laktozę, czerwień fenolową, tiosiarczan sodu i siarczan żelazawy. Podczas gdy podłoże zawiera glukozę (tj. D-glukozę lub dekstrozę) w niskim stężeniu 0, 1%, stężenie sacharozy i laktozy utrzymuje się na wysokim poziomie 1%.

Jeśli bakterie mają możliwość wykorzystania jednego lub więcej z trzech cukrów, kolor pożywki zmienia się z czerwonego na żółty. Jeśli bakterie mają zdolność do produkcji H ₂ S, pożywka uzyskuje czarny kolor. Ponieważ w podłożu zastosowano trzy cukry i związek żelaza, test nazywa się testem potrójnego cukru.

Wymagane materiały:

Probówki, kolby stożkowe, bawełniane zatyczki, igła do zaszczepiania, autoklaw, palnik bunsena, komora laminarnego przepływu, słoik utylizacyjny, inkubator, agar z potrójnym cukrem (TSI), wyizolowane kolonie lub czyste kultury bakterii.

Procedura:

1. Składniki pożywki agarowej TSI (zawierającej 3 cukry i żelazo jako główne składniki) lub gotowy proszek wymagany dla 100 ml pożywki są odważane i rozpuszczane w 100 ml wody destylowanej w kolbie stożkowej o pojemności 250 ml wytrząsanie i mieszanie (rysunek 7.7).

2. Jego pH określa się przy użyciu papieru lub pH-metru pH i doprowadza się do 7, 4 za pomocą 0, 1N HCl, jeśli jest on większy lub stosując 0, 1 N NaOH, jeśli jest on mniejszy.

3. Kolbę ogrzewa się w celu całkowitego rozpuszczenia agaru w podłożu.

4. Zanim się zestali, podłoże w stanie ciepłym stopionym rozdziela się na 5 probówek (w przybliżeniu po 20 ml).

5. Probówki są z bawełny, pokryte papierem ściernym i związane nicią lub gumką.

6. Są sterylizowane w 121 ° C (ciśnienie 15 psi) przez 15 minut w autoklawie.

7. Po sterylizacji są one usuwane z autoklawu i utrzymywane w pozycji skośnej w celu schłodzenia i zestalenia podłoża, tak aby uzyskać skosy agaru TSI.

8. Badane bakterie zaszczepia się w warunkach aseptycznych, najlepiej w komorze z przepływem laminarnym, w skosy przez wbicie w tyłek i smugi na powierzchni skosów za pomocą sterylizowanej płomieniem igły. Igła jest sterylizowana po każdej inokulacji.

9. Zaszczepione skosy inkubuje się w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w inkubatorze.

Obserwacje:

1. Żółty tyłek i czerwony ukośnie z lub bez produkcji gazu (pęknięcia na agarze):

Stworzyła się skórka sucha i alkaliczna. Tutaj tylko glukoza była stosowana beztlenowo (fermentacyjnie), powodując kwasicę (żółtą). Żaden inny cukier nie został wykorzystany. Ponieważ stężenie glukozy jest mniejsze (0, 1%), niewielka ilość kwasu produkowanego na pochyłej powierzchni jest szybko utleniana, dzięki czemu jest alkaliczna (czerwona).

Ponadto, oksydacyjna dominacja peptonu obecnego w pożywce daje NH _Y, który powoduje skośne odczyny alkaliczne (czerwone). Jednakże, w kolbie, stan kwasu jest utrzymywany z powodu zmniejszonej dostępności tlenu i wolniejszego wzrostu bakterii. Zatem bakterie są glukozo-dodatnie.

2. Żółty tyłek i żółty ukośnie z lub bez produkcji gazu:

Tworzy się kwasowo-skośny i kwaśny skos. Tutaj fermentowano laktozę i / lub sacharozę. Ponieważ ich stężenie w pożywce jest wysokie, produkują dużą ilość kwasów, co prowadzi do kwaśnego nachylenia i kwaśnego tyłka oraz utrzymują stan kwaśny. Zatem bakteria jest pozytywna względem sacharozy / laktozy.

3. Czerwony tyłek i czerwony tył:

Żaden z trzech cukrów nie został sfermentowany. Zamiast tego, peptony zostały katabolizowane w warunkach beztlenowych i / lub tlenowych, co spowodowało stan zasadowy z powodu wytwarzania amoniaku.

Jeśli nastąpi tylko aerobowa degradacja peptonów, tylko skośna powierzchnia staje się alkaliczna (czerwona). Jeśli występuje aerobowa i beztlenowa degradacja peptonu, zarówno skos jak i kolba stają się zasadowe (czerwone). Zatem bakterie są ujemne pod względem cukru.

4. Czarowanie tyłka:

Oprócz jednego z powyższych warunków, jeśli pojawi się czernienie niedopałka, wskazuje to, że bakteria jest zdolna do wytwarzania H2S z użyciem nieorganicznej siarki (tiosiarczanu sodu) obecnej w pożywce.

H2S łączy się z siarczanem żelazawym w środowisku, tworząc czarne osady siarczku żelazawego, powodując zmianę zabarwienia ośrodka na czerń. Zatem bakterie są dodatnie pod względem H2S.

5. Bez zaczernienia:

Bakterie nie są zdolne do wytwarzania H2S z wykorzystaniem nieorganicznej siarki (tiosiarczanu sodu) obecnej w pożywce. Zatem bakteria jest ujemna pod względem H2S.